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Mutagénesis en la cual la mutación es causada por inducción in vitro, dirigida a una región específica de la molécula de ADN. El método más común involucra el uso de un mutante oligonucleótido químicamente sintetizado que se puede hibridizar con la molécula específica de ADN. El ADN bicatenario resultante puede ser transferido a una línea de célula bacteriana y las cepas mutantes pueden ser recuperadas.